Essai invasif ameliore

Improved invasion assay

Abstract

The invention relates to improved methods of detecting and characterizing polynucleotide sequences and variations in polynucleotide sequences. The invention further relates to a device that can be used to detect and characterize polynucleotide sequences and variations in polynucleotide sequences. The invention is directed to an improved invasion assay to methods of analyzing invasion assay data. The invention is based, in part, on a discovery that signals due to the cleavage of a probe annealed to a template polynucleotide (e.g. DNA or RNA) can exhibit behavior over time that is different from the behavior over time of signals produced by background reactions (e.g. reactions that are not dependent on the presence of target polynuclotide). For example, the positive signal produced by many invasion assays (i.e., the signal that indicates an cleavage of a probe oligonucleotide annealed to a target polynucleotide) can be fit to a polynomial that is higher in order than the polynimial required to characterize the background signal. It is thus possible to determine the results of an invasion assay in real time or at the conclusion of the assay by determining whether the behavior of the signal it produced over time is different from that of a typical, estimated theoretical or actually measured background signal.
L'invention porte sur des procédés améliorés de détection et caractérisation de séquences de polynucléotides et de leurs modifications, et sur un dispositif à cet effet. Ledit dispositif consiste en un essai amélioré d'invasion, tandis que lesdits procédés consistent en méthodes d'analyse des données fournies par l'essai. L'invention se base en partie sur une découverte selon laquelle les signaux dus au clivage par un polynucléotide d'une sonde chauffée (par exemple de l'ADN ou de l'ARN) peuvent avoir dans le temps un comportement différent de celui de signaux résultant de réactions de fond (par exemple des réactions indépendantes de la présence du polynucléotide cible). Par exemple, le signal positif produit par de nombreux essais d'invasion (c.-à-d. le signal indiquant le clivage d'un oligonucléotide sonde chauffé à un polynucléotide cible) peut être relié à une fonction polynome d'ordre plus élevé que la fonction polynome nécessaire pour caractériser le signal de fond. Il est ainsi possible de déterminer le résultat de l'essai d'invasion soit en temps réel soit à la fin de l'essai, en déterminant si le signal produit dans le temps différe d'un signal de fond type estimé, théorique ou en cours de mesure.

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Patent Citations (6)

    Publication numberPublication dateAssigneeTitle
    EP-0972848-A2January 19, 2000Perkin-Elmer CorporationSelbst dämpfende fluorescenz Probe und Verfahren
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NO-Patent Citations (2)

    Title
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